1.首先，用某种限制性内切酶切割质粒，使质粒中出现缺口，露出粘性末端。

2.用同样的限制性内切酶切割目标基因，产生同样的粘性末端。

3.将切割的靶基因片段插入质粒切口。首先碱基互补配对组合，两个粘端吻合，碱基之间形成氢键。

4.加入适量的DNA连接酶，催化两条DNA链之间形成磷酸二酯键，从而连接相邻的脱氧核糖核酸，形成重组DNA分子。例如，人胰岛素基因通过这种方法与大肠杆菌中的质粒DNA分子结合，形成重组DNA分子。